簡(jiǎn)要描述:熒光-PCR法注意事項:.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時(shí)間;4.循環(huán)次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應動(dòng)力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。
產(chǎn)品分類(lèi)
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性能指標:點(diǎn)擊了解更多熒光-PCR法。
.試劑盒檢測特異性為00%
2. 檢測試劑盒重現性為00%
3. 靈敏度可達到03/ml
4. 有效期為6個(gè)月產(chǎn)品名稱(chēng):熒光-PCR法
規格:48T/盒
類(lèi)別:熒光-PCR法
運輸:低溫、避光、快遞免費送貨上門(mén)。
用途:生化實(shí)驗,合成實(shí)驗等試驗。
運輸及保存:低溫運輸,-20℃保存, 保存期限為 6 個(gè)月。
自備試劑:樣品 RNA。
使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉錄)反應合成 cDNA
. 按下表配制 RT 反應體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),
反應終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。
5. 70℃保溫 0 分鐘以終止反應,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。
反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長(cháng)度: 5-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長(cháng)至0kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過(guò)多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會(huì )形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個(gè)堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.~umol或0~00pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會(huì )引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會(huì )。
2-基-3-硝苯甲酯 59382-59- 400µL Bovine Serum Albumin, Acetylated -20℃保存
三基膦 594-09-2 00µg Vitronectin -20℃保存
3-氯-2-硝苯胺 59483-54-4 5mg Thioredoxin -20℃保存
DL-蛋氨 59-5-8 mg Streptavidin -20℃保存
-基吡唑-4-甲 5952-92- 0.mL Streptavidin,HRP conjugated 頻繁使用時(shí)放4℃,不用時(shí)放-20℃
二基丙二 595-46-0 0.5mL Streptavidin,AP Conjugated 4℃保存,請勿冷凍
4-溴-2-甲氧苯胺 59557-9-4 0mg Avidin -20℃保存
3-氨基-2-萘甲 5959-52-4 2mg HRP-Avidin -20℃保存
2,2-二基-3-羥基丙 597-3-9 00mg AP-Avidin -20℃保存
2,2-二基丁二 597-43-3 5mg FITC-Avidin -20℃保存
2-甲乙酯苯胺 59777-72-9 mg R-Phycoerythrin Avidin -20℃保存
2,5-二氯煙 59782-85-3 0mg Nuetral Avidin -20℃保存
代嗎啉 ,-二氧化物鹽鹽 5980-62-6 g Biotin -20℃保存
,-環(huán)丙基二羧 598-0-7 5mg FITC-Biotin -20℃保存
溴丙 598-3-2 25mg Biotin-BSA -20℃保存
熒光-PCR法LM-37瓊脂 規格: ml Monkey apoprotein A,apo-A
改良緩沖蛋白胨水 規格: 0.2ml Monkey apoprotein B00,apo-B00
枸櫞鹽培養基 規格: 0.2ml Monkey Macrophage Migration Inhibitory Factor,MIF
Christensen尿素瓊脂 規格: 0.ml Peanut agglutinin,PNA
尿素酶瓊脂基礎 規格: 0.2ml Sophora japonica agglutinin,SJA
MR-VP培養基 規格: 0.2ml Aflatoxin,AFT
緩沖葡萄糖蛋白胨水 規格: 0.ml Chicken ,3-βD glucosidase,,3-βD-Glu
V-P半固體瓊脂 規格: 0.ml Hydroxycorticosteroids,7-OHCS
胰蛋白胨水 規格: 0.ml Chicken 7-ketosteroids,7-KS
明膠培養基 規格: 0.ml Chicken 5-Nucleotidase,5-NT
鹽胨水培養基 規格: 0.2ml Chicken factor B,BF
靛基質(zhì)試驗培養基 規格: 0.2ml Chicken C-Reactive Protein,CRP
吲哚培養基 規格: 0.ml Chicken L-Phenylalanine ammonla-lyase,PAL
丙二培養基 規格: 0.ml Chicken N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG
馬尿培養基 規格: 0.ml Chicken Interferon α,IFN-α
注意事項:
①加入試劑的順序應*,以保證所有反應板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)中標明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應揮發(fā),避免長(cháng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對光敏感,避免長(cháng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時(shí)應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應按標簽說(shuō)明書(shū)儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過(guò)后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
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