簡(jiǎn)要描述:乙型肝炎病毒通用型探針?lè )晒舛?PCR 試劑盒操作簡(jiǎn)單為了使實(shí)驗結果穩定、有效、可靠,我們建議使用商品化的試劑盒進(jìn)行提取,嚴格按照對應試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,樣本核酸提取過(guò)程中應避免污染,提取好的模板樣品如不能立即檢測,建議-15℃以下保存。
產(chǎn)品分類(lèi)
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基本屬性:
【產(chǎn)品名稱(chēng)】 | 乙型肝炎病毒通用型探針?lè )晒舛?PCR 試劑盒 |
【型號】 | GY-L5501 |
【包裝規格】 | 50次/盒 |
特點(diǎn):
1.即開(kāi)即用,用戶(hù)只需要提供樣品DNA模板。 2.引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化,靈敏性高。 3.提供陽(yáng)性對照,便于區分假陰性樣品。 4.特異性高,引物是根據曲霉屬通用DNA高度保守區設計,不會(huì )跟其他微生物的DNA發(fā)生交叉反應。 5.既可用于定性檢測,又可用于定量檢測。用于定量檢測時(shí)線(xiàn)性范圍至少為5個(gè)數量級。 6.本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針?lè )晒舛縋CR反應。 7本產(chǎn)品只能用于科研。 |
【使用方法】
一、稀釋標準曲線(xiàn)樣品(以10E1-10E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產(chǎn)品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對照,只提供無(wú)傳染性的DNA片段作為陽(yáng)性對照。 1.標記6個(gè)離心管,分別為6,5,4,3,2,1。 2.用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同。 3.在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的標準曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。 4.換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽(yáng)性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標準曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。 5.換槍頭,在4號管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E4拷貝/μL的標準曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。 6.重復上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標準曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。 二、樣品 DNA 的制備 7.如果有N個(gè)樣品待提取,設置N+2個(gè)提取,多出的是PC(樣品制備陽(yáng)性對照)和NC(樣品制備陰性對照)??梢匀£?yáng)性對照的1000倍稀釋液10μL再加上一定量的水,使總體積與待提取樣品的規定體積一致,以此作為PC。另外用水作為NC。 8.用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數兼容。 三Probe qPCR反應(20μL體系,在樣品制備室進(jìn)行) 9.如果做定量分析并且只做1次重復,則標記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR 陰性對照(用水做模板),6個(gè)用于標準曲線(xiàn)。如果做定性分析,并且只做1次重復,則標記N+4個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對照(用水做模板),1個(gè)用于PCR陽(yáng)性對照(用第4號管的陽(yáng)性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。 10.在標記管中按下表加入各成分 |
數據處理
12. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽(yáng)性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線(xiàn)。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線(xiàn)上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。
13. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽(yáng)性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大 于或等于 40。陽(yáng)性對照必須有熒光對數增長(cháng),有典型擴增曲線(xiàn),Ct 值應該 小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽(yáng)性。如果在 35-40 之間,則重復一次。重復實(shí)驗的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 40,則為陽(yáng)性。
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